MTT细胞增殖检测试剂盒（MTT Cell Proliferation Assay）被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物Formazan，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。
艾美捷CytoSelectMTT细胞增殖检测提供了用于测量和监测细胞增殖的比色格式。该试剂盒包含足够的试剂，可用于评估96孔板中的960个测定或24孔板中的192个测定。可以将细胞铺板，然后用影响增殖的化合物或试剂处理。然后用增殖试剂检测细胞，通过细胞还原酶将其在活细胞中从黄色的四唑MTT转变为紫色的甲maz形式（图1）。细胞增殖的增加伴随着信号的增加，而细胞增殖（和信号）的下降可以表明化合物的毒性作用或次佳的培养条件。该测定原理是基本的，并且可以应用于大多数真核细胞系，包括粘附和非粘附细胞以及某些组织。这种细胞增殖试剂可用于检测细菌，酵母，真菌，原生动物以及培养的哺乳动物和鱼类细胞中的增殖。
图1：活细胞中黄色MTT和紫色福尔马林产物的化学结构。
艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒组分：
1. MTT Cell Proliferation Assay Reagent (Part No. 125201): One 10 mL bottle of MTT reagent.
2. Detergent Solution (Part No. 125202): One 100 mL bottle of Detergent Solution.
艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案：
1.制备含有0.1-1.0 x 106的细胞悬液培养基中的细胞/ml。
2.将每孔100μL加入96孔细胞培养板或每孔500μL加入24孔细胞培养物中有或没有待测化合物的板。细胞在37°C和5%培养24-96小时加湿培养箱中的二氧化碳。
3.加入10μlCytoSelect™ MTT细胞增殖测定试剂，如果使用96-孔板，或24孔板的每个孔50µL。
4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小时，直至可见紫色沉淀（细胞在光学显微镜下可以更精确地观察到沉淀物）
5.在96孔板的每孔中加入100μL去污剂溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污剂溶液盘子。
6.在室温下孵育2小时至避光过夜。
注意：在井中与洗涤剂溶液长时间孵育可能导致沉淀或浑浊可以增加背景。如果观察到沉淀，将板在37℃加热10-20分钟并搅拌溶解沉淀物。
7.使用540-570nm作为主波长读取吸光度。
MTT细胞增殖检测试剂盒引用文献（部分）：
1. Uranowska, K. et al. (2021). expression of chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4) in melanoma cells is downregulated upon inhibition of BRAF. oncol Rep. 45(4):14. doi:10.3892/or.2021.7965.
2. Housein, Z. et al. (2021). In vitro anticancer activity of hydrogen sulfide and nitric oxide alongside
nickel nanoparticle and novel mutations in their genes in CRC patients. Sci Rep. 11(1):2536. doi:10.1038/s41598-021-82244-x.
3. Yoshiya, S. et al. (2020). Impact of Capicua on Pancreatic Cancer Progression. Ann Surg Oncol.doi: 10.1245/s10434-020-09339-z.