现在已经确定COX有两种不同的亚型。COX-1在多种细胞类型中组成性表达,并参与正常细胞内稳态。多种刺激物,如佛波酯、脂多糖和细胞因子,导致第二种COX亚型COX的诱导表达.在急性炎症条件下,COX-2负责PGs的生物合成。这种诱导型COX-2被认为是非甾体药活性的靶酶。
艾美捷COX荧光抑制剂筛选试验为筛选绵羊COX-1和人类重组COX-2的同工酶特异性抑制剂提供了一种方便的基于荧光的方法。该分析利用了柯萨病毒的过氧化物酶成分。PGG2和ADHP(10-乙酰基-3,7-二羟基苯恶嗪)之间的反应产生高荧光化合物resorufin。
使用板块上的井没有特定的模式。然而,有需要将三个孔指定为非酶或背景孔。这些孔的荧光须从COX孔中测得的荧光中减去。建议对每个COX样品进行一式三份的分析。
艾美捷COX荧光抑制剂筛选试剂盒实验注意事项:
•所有孔中的分析终体积为200µl。
•在分析中使用稀释的分析缓冲液。
•所有试剂(酶除外)须平衡至室温在开始化验之前。
•无需一次性使用板上的所有孔。
•不必同时使用这两种酶。可以使用COX-1或COX-2进行研究。
•建议化验样品一式三份,但用户可自行决定。
•可对30个抑制剂样品进行一式三份或四十六份的分析。
•在室温下进行分析。
•用530-540 nm的激发波长和585-595 nm的发射波长监测荧光。
•在靠近荧光计的位置启动花生四烯酸反应,因为有必要在反应开始两分钟后读取平板。