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Rockland 艾美捷NFkB p65抗体说明书
发布时间:2022-04-15        浏览次数:102        返回列表
 NFkB初被鉴定为一种与B细胞中的免疫球蛋白κ轻链增强子结合的因子。随后在非B细胞中发现,它以非活性细胞质形式存在,由与IkB结合的NFkB组成。NFkB初被鉴定为一种异二聚体DNA结合蛋白复合物,由p65RelA)和p50NFKB1)亚基组成。其他确定的亚单位包括p52NFKB2)、c-RelRelBp65cRelRelB亚单位负责反式激活。p50p52亚单位具有DNA结合活性,但反式激活能力有限。据报道,p52NFkB亚单位p65形成转录活性异二聚体,类似于p50/p65异二聚体。细胞中也可能存在低水平的p52p50同源二聚体。p52/p65p50/p65的异二聚体由IkB-a在细胞质中的物理失活调节。IkB-ap65亚单位结合,阻止核定位和DNA结合。IkB-a结合掩盖了NFkB核定位信号(NLS)。广泛的外部刺激导致NFkB的激活,并引发信号级联,终聚集在IkB激酶(IKK)复合物上。活化的IKK特异性地直接磷酸化IkB-a,该磷酸化事件针对IkB-a进行降解。因此,NFkB NLS被发现,核易位发生。

 

Rockland/艾美捷 该抗体从全兔血清中纯化,所述全兔血清通过使用马来酰亚胺重复免疫NFkB p65肽制备,所述NFkB p65肽对应于与KLH结合的人类蛋白质的NLS。将半胱氨酸残基添加到氨基末端以促进偶联。


 

Rockland/艾美捷 抗NFKB p65抗体已在ELISAICCWBIF中检测。NFkB凝胶位移分析在20µl反应中组装,反应中含有0.28 pmoles NFkB低聚物,在10mM TrispH 7.6)、50 mM NaCl0.5 mM EDTA1.0 mM DTT10%甘油中。一些程序规定添加0.05%NP-40。当使用纯化蛋白时,250-300 ng应足以产生凝胶移位复合物,而使用10µg HeLa核提取物。然后将凝胶转移反应在室温下培养30分钟。配合物在三甘氨酸丙烯酰胺凝胶上溶解。含有溴酚蓝和二甲苯氰醇的负载染料只能添加到阴性对照反应中,因为这些染料会增加NFkB络合物的解离。当使用HeLa核提取物作为结合蛋白的来源时,预计会出现两种序列特异性凝胶位移复合物,包括p50/p50同二聚体和p50/p65异二聚体。对于表达p52p50p65的细胞,可以观察到多达四种序列特异性凝胶位移复合物(p52/p52p50/p50p52/p65p50/p65),如果存在高水平的p65,也可能检测不到p65/p65同源二聚体。已观察到以下试剂可增强体外NFkB结合:毫摩尔量的GTPATP、精胺、亚精胺、钡或钙离子,以及µM量的Co+3NH36

 

这种亲和纯化抗体针对人类p65的核定位序列(NLSNLS,可用于确定其在各种分析中的存在。识别的表位与NFkB异二聚体p65亚基的NLS重叠。因此,抗体选择性地结合NFkB的激活形式。抗NFkB p65 NLS可能与其他蛋白质发生非特异性反应。

 

Rockland/艾美捷Mcl-1抗体基本参数:

基因名称:RELA

测试应用程序:ELISA; IF; WB

目标物种:人类

已知交叉反应性:人类

寄主种类:兔子

克隆性:多克隆

格式:IgG

免疫原类型:肽

物理状态:液体(无菌过滤)

装运条件:干冰

 

Rockland 相关研究方案:

重组单链抗体抗人CD45抗体  400-301-MR2

重组抗CD20 Fab抗体  400-001-MT2

重组DIG(DIG45)抗体  400-001-MG2

重组抗VEGF RTH258单链抗体  400-001-MT5

重组GST抗体  400-001-MR7

重组RFP抗体  400-001-MS3

 

Rockland研究领域包含高质量的抗体——载脂蛋白、细胞周期/凋亡、细胞因子、细胞信号蛋白、酶类、细胞外基质、转录因子(NFkB)和泛素(Ubiquitin)等识别抗体,应用范围包括Western blot、免疫组化、免疫荧光和ELISA等,十分广泛。

 

艾美捷科技是Rockland的中国代理商,为科研工作者提供的产品与服务。