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Cytoskeleton 丨的荧光法检测——艾美捷方案大全
发布时间:2021-11-24        浏览次数:99        返回列表
 G蛋白的共同特点是,当结合了GTP时即成为活化形式,这时可作用于下游分子使之活化,而当GTP水解成为GDP时(自身为GTP酶)则恢复到非活化状态(分子开关),正常情况下,在细胞中,小G蛋白会在跟GDP结合的“关闭状态”和 GTP 结合的“开启状态”之间循环,这种循环过程主要由细胞内的小G蛋白调节因子来控制,胞内小G蛋白调节因子主要有两类:一类是可以增强小G蛋白的活性的鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor, GEF),另一类是可以降低小G蛋白活性的GTP酶活化蛋白(GTPase activating protein, GAP)。

 

接下来就主要来聊一聊小G蛋白活性增强剂——鸟苷酸交换因子(GEF),GEF 是通过催化其目标 GTPase上的核苷酸交换来发挥作用,GEF与核苷酸结合的 GTPase 结合,这会导致结合的核苷酸被释放,从而产生不含核苷酸的GEF-GTPase 反应中间体。这种不含核苷酸的复合物随后将结合新的核苷酸,然后GEF再从GTPase 中释放出来。

 

由于GEFs对GDP-GTPases的亲和力高于对相应GTP-GTPases的亲和力,在正常细胞中GTPGDP比率约为10:1GEFs将推动从GDP-GTPasesGTP-GTPases的转换。

 

艾美捷 Cytoskeleton GEF活性检测试剂盒,是一款基于荧光法的检测GTP酶上的核苷酸转换的试剂盒,可适用于常规的96孔格式或高通量384孔格式。

 

Cytoskeleton丨GEF活性检测试剂盒组成部分:

 

1.Exchange Buffer

2.His标签 Cdc42蛋白

3.His标签 Rac1 蛋白

4.His标签 RhoA 蛋白

5.His标签 hDbs 蛋白(作为 Cdc42 和 RhoA GEF的阳性对照 )

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

 

艾美捷 Cytoskeleton丨GEF活性检测试剂盒检测原理:

通过检测荧光核苷酸类似物 N-甲基邻氨基苯甲酰-GTPmant-GTP)对 GTPase 的结合情况来检测GEF的活性的。一旦mant-GTP与 GTPase 结合, mant-GTP的荧光强度(Ex360 nmEm440 nm)显著增加,通过检测游离的mant-GTPGTPase 结合的 mant-GTP 之间的荧光值差异,即可检测样本中GEF的活性。

 

艾美捷 Cytoskeleton丨GEF活性检测试剂盒的主要用途和应用:

 

测定未知GEFs活性;

小GTPases及其相关GEFs的生化特性表征;

研究不同辅助因子或蛋白结构域对GEF活性的调控;

筛选GEFs或GTPases突变蛋白的活性和底物特异性;

HTS(高通量筛选)筛选鉴定GEF抑制剂。