为什么需要封闭？
封闭步骤可减少一抗和二抗与非靶标位点进行非特异性结合时所产生的本底信号。理想情况是，封闭剂将占据样本中的“黏性”位点，比如暴露的带电性或疏水性蛋白表面，同时不会干扰一抗/二抗识别靶表位，从而尽可能提高信噪比(S/N)。
用封闭血清效果好吗？
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。对于适用多抗的实验，二抗种属来源的正常血清是封闭处理的金标准。
封闭血清如何使用？
推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟（或者室温1h），清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。
实用Tips
1.的稀释比例需研究者通过实验来确定。建议的起始稀释比例如下：IHC-p（1：10-20）；IF / ICC（1：10-20）；ELISA（1：100）。
2.封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。
3.封闭结束后，用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加一抗。
4.每张切片需要量，可以参考50ul PBS + 5ul 血清 来计算。
5.如何如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损：
将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2～8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。如果开盖后未使用完，我们建议存放于4℃，但请勿超过一个月。
Bone marrow mesenchymal stem cells protect against n-hexane-induced neuropathy through beclin 1-independent inhibition of autophagy
Hao J, Li S, Shi X, et al. Sci Rep, 2018, 8(1): 4516.
2,5-Hexanedione induces autophagic death of VSC41 cells via a PI3K/Akt/mTOR pathway
Guan H, Piao H, Qian Z et al. Mol Biosyst.
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BMS0140 |
Normal Donkey Serum |
正常驴血清 |
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